date:2022-07-06 16:01:39
在本應(yīng)用示例中，我們展示了如何從μ-Slide VI 0.4通道載玻片中洗脫培養(yǎng)后的貼壁細(xì)胞。該方法適用于不同規(guī)格的通道載玻片。
1.根據(jù)實(shí)驗(yàn)說明將您的細(xì)胞培養(yǎng)到所需的匯合度。
裝有細(xì)胞和培養(yǎng)基的μ-Slide VI 0.4
2.從μ-Slide VI 0.4通道載玻片的通道口中取出培養(yǎng)基，不要吸干整個(gè)通道。
3.用PBS或任何其他適當(dāng)?shù)木彌_液清洗兩次，然后從另一端吸出。每個(gè)通道使用體積為100μl。我們建議同時(shí)使用細(xì)胞培養(yǎng)吸引器和移液器。如圖所示，使用吸引器的尖端和移液器。
µ-Slide VI 0.4的一個(gè)通道的橫截面顯示了PBS洗滌步驟
4.使用細(xì)胞培養(yǎng)吸液器從通道中吸出全部PBS
在這個(gè)步驟中，緩沖液從容器口和通道中完全去除
5.立即用30μl分離溶液（例如胰蛋白酶/EDTA或Accutase）重新填充通道。如圖所示，將移液器吸頭直接放在通道的入口上。
將30µl分離溶液填充到空通道中
6.再將您的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中。由于生長(zhǎng)面積和體積的縱橫比不同，分離過程可能需要比平時(shí)更長(zhǎng)的時(shí)間（2-3分鐘）。用相差顯微鏡觀察細(xì)胞脫離。如果沒有發(fā)生分離，請(qǐng)?jiān)黾臃蛛x溶液的濃度或使用更長(zhǎng)的孵育時(shí)間。
細(xì)胞會(huì)在幾分鐘后分離
7.細(xì)胞成圓形并分離后，用100μl新鮮培養(yǎng)基或終止溶液沖洗每個(gè)通道
分離的細(xì)胞被100µl新鮮培養(yǎng)基沖出通道
8.從通道的另一端取出細(xì)胞懸液。如果還剩一些細(xì)胞，請(qǐng)重復(fù)沖洗步驟。
9.收集懸浮細(xì)胞并去除或稀釋分離溶液
在細(xì)胞懸浮后，可以通過從通道中吸出溶液來收集
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